Mise en route du test à l'EMA (Eosine 5'maléimide) en cytométrie de flux pour le diagnostic de la sphérocytose héréditaire
Le test à l'EMA est un test de screening, sensible (93-96%), spécifique (95-99%) et rapide à réaliser.
En cas de positivité (score > 16%), une confirmation sera réalisée par l'électrophorèse des protéines de la membrane du GR (Dr B. Gulbis à Erasme).
Il faut penser au diagnostic de Sphérocytose Héréditaire (SH), devant :
- une anémie hémolytique chronique,
- des antécédents familiaux (maladie autosomique dominante 75% des cas),
- une CCMH augmentée (> 36g/dl)
- la présence de sphérocytes sur le frottis sanguin.
Le test EMA est utilisé en parallèle du test de cryohémolyse pour le screening.
Pour rappel, la SH est présente partout dans le monde, avec une prévalence élevée, estimée entre 1/2000 et 1/5000 dans le nord est de l'Europe.
Physiopathologie :
Cette pathologie est liée à une anomalie quantitative ou/et qualitative de l'une des protéines membranaires impliquées dans l'attachement du cytosquelette à la membrane du GR.
Les protéines impliquées sont :
- bande 3 (50 % des cas)
- spectrine (30 % des cas)
- plus rarement ankyrine ou protéine 4.2
- dans 10 % des cas d'autres protéines sont impliquées.
Ce défaut d'ancrage au cytosquelette de l'hématie provoque des pertes successives de membrane et une sphérisation progressive des hématies. Il en résulte un manque de déformabilité des hématies, responsable d¿une anémie hémolytique.
Principe du test :
L'Eosine 5'maléimide (EMA) est une molécule fluorescente qui se lie aux protéines Bande 3 des hématies, dont on peut étudier le signal en cytométrie de flux.
Ce test permet de quantifier le % de perte de la protéine Bande 3 à la surface de l'hématie, mais aussi des autres protéines déficitaires (spectrine, ankyrine, protéine 4.2), en comparaison des hématies de plusieurs témoins.
En cas d'AHAI à Coombs positif (avec présence de sphérocytes sur le frottis), le test à l'EMA ne montre habituellement pas de perte de fluorescence.
Toutefois, des faux positifs sont décrits en cas d'ovalocytose mélanésienne (anomalie de la protéine bande 3).
De même, des faux positifs ont été décrits chez certains auteurs en cas d'elliptocytose.
Pour réaliser l'analyse :
1 tube EDTA pour le secteur de cytométrie en flux, à acheminer le jour même.
Eviter de prélever le vendredi.
Délai de réponse : 72 heures
Interprétation des résultats :
Le résultat est rendu sous forme d'un pourcentage de perte de fluorescence par rapport à des témoins, à l'aide d'un score :
- Score < 16% : sphérocytose peu probable
- Score : entre 16-21% : douteux d'où test de confirmation
- Score > 21% : sphérocytose probable d'où test de confirmation.
